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小鼠MMP-9 (JEM-081)

英文名称:Mouse MMP-9 ELISA Kit
中文名称:小鼠的金属蛋白酶9
产品货号:JEM-081
检测方法:酶联免疫法/酶免法(ELISA)
规格:96T/48T
经营品牌:安徽巧伊生物
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:2-8℃。
2.有效期:6个月
运输条件:低温运输,用干冰或者冰袋低温运输。

MMP-9简介:

MMPs蛋白是一组具有锌指结构的钙依赖的能够降解胞间基质成分的一组蛋白的统称。MMP-9是该蛋白家族成员中的研究较多的一种,是一种明胶酶(明胶酶B)。MMP-9有许多作用底物,如Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ、Ⅺ型胶原、蛋白聚糖的核心蛋白、明胶、纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、弹性蛋白等。

结构上,MMP-9的催化区包括3个重复的型纤维连接蛋白结构域,与明胶或弹性蛋白有高度的亲和力。MMP-9还有脯氨酸丰富的结构域和含锌指结构的结构域,MMP-9包含一个V型的胶原蛋白结构域,这个结构域有高度的糖基化作用,,它影响底物的特异性以及有抗衰变的作用。

MMP-9是以酶原的形式从胞内分泌到胞外,可被MMP-3、MMP-2或者次氯酸裂解,MMP-3可能是MMP-9最有效的激活剂。金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)作为MMP-9的抑制剂,与MMP-9的酶原或活化后酶的催化区的羧末端特异性结合,形成复合物。

MMP-9可由角化细胞、单核细胞、巨噬细胞和多形核白细胞等产生,在一些炎性反应的过程中常伴随着MMP-9的产生。

检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中MMP-9的浓度。MMP-9捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标本或参考品时,其中的MMP-9会与捕获抗体结合,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠MMP-9抗体后,抗小鼠MMP-9抗体与MMP-9接合,形成夹心的免疫复合物,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合,亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来;其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂,若样本中存在MMP-9将会形成免疫复合物,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测,读其450nm处的OD值,MMP-9浓度与OD450值之间呈正比,通过参考品绘制标准曲线,对照未知样本中OD值,即可算出标本中MMP-9浓度。

 

                     小鼠MMP-9参考标准曲线

 

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注意:本图仅供参考,应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。

灵敏度,特异性和重复性:

1.灵敏度:多次重复结果表明,最小检出量为42pg/ml

2.特异性:与小鼠MMP-1MMP-2MMP-3MMP-8人及大MMP-9等没有交叉反应。

3.重复性:板内,板间变异系数均<10%.

参考文:

1. Jiang, W. and J.S. Bond (1992) FEBS Lett. 312:110.

2. Engsig, M.T. et al. (2000) J. Cell Biol. 151:879.

3. Nagase, H. and J.F. Woessner, Jr. (1999) J. Biol. Chem. 274:2191.

4. Bergers, G.R. et al. (2000) Nat. Cell Biol. 2:737.

5. OConnell, J.P. et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:14967.

6. Bischof, P. et al. (2002) J. Reprod. Immunol. 55:3.