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Human granzyme B ELISA KIT

英文名称:Human  granzyme B ELISA KIT
中文名称:颗粒酶B
产品货号:JEH-265
检测方法:酶联免疫法/酶免法(ELISA)
规格:96T/48T
经营品牌:安徽巧伊生物
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:2-8℃。
2.有效期:6个月
运输条件:低温运输,用干冰或者冰袋低温运输。

GRANZYME B简介:

颗粒酶B属于丝氨酸蛋白酶颗粒酶家族的一员,是人类基因组鉴定的五种颗粒酶(ABHKM)之一。颗粒酶B分子量为32kDa,只在细胞毒T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤(NK)细胞中表达。颗粒酶B的前体有247个氨基酸,其中包括18个氨基酸的信号肽和2个氨基酸的前肽。颗粒酶B进入颗粒内后,前肽(Gly-Glu)被从N端去除形成活性蛋白酶,信号肽被切割,最终形成成熟链。人颗粒酶B的氨基酸序列与犬、大鼠和小鼠颗粒酶B分别有71%69%68%的同源性。

颗粒酶B在颗粒介导的凋亡中发挥着重要作用。研究表明,颗粒酶B主要通过调节胞外基质中的VE钙粘蛋白、层粘连蛋白、纤维连接蛋白等,在皮肤损伤,修复以及炎症等方面发挥作用。与颗粒酶A血浆含量保持不变不同,在过敏性皮炎和银屑病患者的颗粒酶B血浆水平比正常人要高很多,而克罗恩病患者血清颗粒酶B含量明显高于正常人,这些都表明了颗粒酶在炎症调节中起重要作用。

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中GRANZYME B的浓度。GRANZYME B捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标本或参考品时,其中的GRANZYME B会与捕获抗体结合,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人GRANZYME B抗体后,抗人GRANZYME B抗体与GRANZYME B接合,形成夹心的免疫复合物,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合,亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来;其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂,若样本中存在GRANZYME B将会形成免疫复合物,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测,读其450nm处的OD值,GRANZYME B浓度与OD450值之间呈正比,通过参考品绘制标准曲线,对照未知样本中OD值,即可算出标本中GRANZYME B浓度。

 

           人GRANZYME B参考标准曲线

注意:本图仅供参考,应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。

灵敏度,特异性和重复性:

1.灵敏度:多次重复结果表明,最小检出量为17.5pg/ml

2.特异性:与人FGF R1β (IIIc)/Fc ChimeraGranzyme AGranzyme H等没有交叉反应。  

3.重复性:板内,板间变异系数均<10%.

参考文献:

1. Turner, C.T. et al. (2017) Matrix Biol. 1387.

2. Kim, T.J. et al. (2018) J. Biomarkers 23:161.

3. Hlongwane, P. et al. (2018) Biomedicines 6:72.

4. Smyth, M.J. et al. (1996) J. Leukoc. Biol. 60:555.

5. Garcia-Sanz, J.A. et al. (1990) J. Immunol. 145:3111.

6. Caputo, A. et al. (1988) J. Biol. Chem. 263:6363.